RepA蛋白质的Dna结合特性参与分区和共生质粒的复制因子的自身调节地区Rhizobiumetli repAbc家庭
a . Perez-Oseguera硕士Ramirez-Romero, Cevallos硕士学位
Centro de Investigacion尤其成为de Nitrogeno a . p . 565 -一个美联社。墨西哥,自治库埃纳瓦卡,莫洛雷斯
作为repABC质粒家族的一员,r . etli共生质粒的复制因子地区包含三个基因(repA, repB和repC)和序列保守部分repB和repC (Ramirez-Romero et al . 1997年)。
repABC基因的遗传分析表明,他们是有组织的操纵子。repA和repB基因编码的蛋白质需要在质粒的稳定性,在质粒人类控制。此外,它已被证明,RepA充当trans-acting不相容因素(Ramirez-Romero et al . 2000年)。
人们很少知道repABC基因的调控。理解这个操纵子的转录特征:转录开始网站被确认。-10年和-35年hexameric repABC子元素被突变分析、局部和负转录监管机构及其目标站点被遗传和生化分析。
几个repA: gusA融合了识别所需的最小区域的DNA操纵子的表达。结果表明,上游启动子区域是包含在82个基点的代表a repABC操纵子的转录起始站点被发现57英国石油公司上游的起始密码子oi代表a .这个网站的上游序列类似于-35年和-10箱的大肠杆菌cr70发起人一致认可。公认的-35年和-10年的突变分析框显示,他们正确地识别。
的P-glucuronidase活动repA: gusA融合在repA的存在但不压抑RepB和RepC,表明repA负转录监管机构。
证明RepA与RepA序列位于上游的基因,两种策略都紧随其后。首先,DMS的碳足迹分析包含repA r . etli菌株的体外::gusA, repA存在与否的。这些实验的结果表明,RepA的假定的结合位点是一个反向重复序列RepA位于上游的14个核苷酸。第二,凝胶迁移转变进行了化验,纯化RepA hexahistidine导数和160 bp RepA的上游地区,作为目标DNA。这些实验表明,RepA能够绑定到这个DNA,和这个活动ATP和ADP的绝对要求,表明ATP水解DNA结合是没有必要的。
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