荚膜红杆菌中氮固定调控产物与其他基因产物的蛋白相互作用新anf基因的鉴定
B.马瑟波，P.德雷斯肯珀，T.德雷珀，S.格罗斯，N.伊萨科维奇，A.帕洛夫斯基，K.拉贝，
Ruhr-Universität波鸿，LS Biologie der microkroorganismen, D-44780波鸿，德国
光合紫色细菌荚膜红杆菌(Rhodobacter capsulatus)可以通过钼(«//-编码)或替代的无杂金属(¿/«/-编码)固定大气中的二氮。固氮酶．这两种固氮酶的合成和活性至少在三个不同的水平上受到铵的严格控制。在第一级，nifAl、nifA2和anfA基因的转录-编码其他«//和anf基因的转录激活因子-由Ntr系统控制，该系统由双组分调节系统NtrB/NtrC和信号转导蛋白GlnB (PII)组成。此外，glnK-amtB和amtY-编码PII-paralog和两个推定的(甲基铵转运蛋白)的表达也受Ntr系统的控制。在第二个调控水平上，NifAl、NifA2和AnfA的活性以ntrc独立的方式被抑制。在没有GlnK的情况下，氨对nfa活性的翻译后控制部分被释放，在glnB-glnK双突变体中完全被取消，而在glnB-glnK突变体背景下，AnfA活性仍然被氨抑制。在第三级调控中，GlnB和GlnK以及AmtB都参与了DraT/DraG系统的铵控制，该系统介导了两种固氮酶还原酶的可逆adp核糖基化，以响应铵可用性的变化。值得注意的是，在glnB-/glnK双突变体中，钼(而不是替代)固氮酶的铵控制完全解除，导致在高浓度铵的存在下合成活性固氮酶。
为了鉴定与上述调控蛋白相互作用的蛋白，进行了酵母双杂交(Y2H)研究。为此，利用低拷贝的gal4基Y2H体系构建荚膜R.荚膜菌DNA文库。该文库沿编码链每12 bp对猎物质粒的激活域进行帧内融合，覆盖了荚膜R.荚膜虫基因组数倍。为了测试该库，GlnB被用作诱饵。正如预期的那样，NtrB确认了当前的监管模式，发现了迄今为止最强的相互作用。NifA2、DraT和atp依赖性解旋酶PcrA的相互作用较弱。使用GlnK作为诱饵，可以证明与ras样蛋白Era相互作用，而与NtrB没有相互作用。然而，GlnB/PcrA和GlnK/Era之间相互作用的作用还有待进一步研究。此外，对定义的蛋白对的分析表明，GlnB与NifAl、GlnK和GlnB本身相互作用。此外，还发现了NifAl-NifAl, NifAl-NifA2, NifAl-GlnK, NifA2-NifA2和NifA2-GlnK的蛋白质相互作用。 These results suggest that (i) NifAl and NifA2 may form both homodimers as well as heterodimers, and (ii) post-translational regulation of NifA activity in response to ammonium is mediated via direct interaction of the transcriptional activator with the PH-like signal transduction proteins.
使用Anfl(由位于下游的基因编码并与anfHDGK共转录)作为诱饵，鉴定出两个新的假定的细胞质Anf蛋白，称为Orß49和0rfl065 (TetR)。Orf349和0rfl065作为Anf蛋白的作用通过对相应突变株体内固氮酶活性的分析得到了证实。orß49和orfl065突变体都没有通过替代固氮酶还原乙炔，而钼固氮酶的活性不受影响。令人惊讶的是，orf349突变体仍然能够在Anf系统中重氮生长，尽管与亲本品系相比水平有所降低。
豆科草中乙醛酸循环:突变体Tn5B22插入干扰苹果酸合成酶编码基因的特征
A.加西亚-德洛斯桑托斯1,A.莫拉莱斯1,1。赫尔南德斯-卢卡斯1,C.Y. Yost2, S. bro1, M.F. Hynes2
Apdo, CIFN /自治。邮政565-A，库尔纳瓦卡，莫尔墨西哥
2卡尔加里大学生物科学系，卡尔加里，加拿大
1.简介
我们对分离受环境信号激活的根瘤菌基因很感兴趣。通常作为植物细胞壁成分发现的糖可能是这些分子信号之一。Oresnik等人(1998年)报道分离了一个参与结瘤竞争的植物诱导鼠李糖基因座。这些数据鼓励我们寻找其他基因，它们的表达是由构成植物多糖的一部分的糖诱导的。
2.程序
我们筛选了3000个随机插入lacZ转座子Tn5B22的豆科植物突变体，用于阿拉伯糖的诱导。
3.结果与讨论
我们鉴定了一个由植物多糖成分阿拉伯糖诱导的染色体位点。Tn5B22破坏ORF的BLASTX分析显示，与不同细菌苹果酸合成酶G (MSG)酶具有高度相似性。味精参与乙醛酸酯的代谢，通过催化乙醛酸酯与乙酰辅酶a发生不可逆的醛醇缩合生成苹果酸酯。与MSG序列的相似性被先前发表的23个MSG序列中严格保守的21个残基所加强(Howard et al. 2000)。此外，假设苹果酸合酶编码基因中的lacZ融合也被乙醇酸诱导，乙醇酸是一种在大肠杆菌中激活味精转录的化合物(Molina et al. 1994)。与wt株系相比，接种了突变体的豌豆植株较矮，叶片出现明显的褪绿现象。该突变体诱导的结节呈白色，表明该突变体对固氮有负面影响。
4.参考文献
Howard BR et al.(2000)生物化学39,3156-3168。刘志刚等(1998)，生物化学学报，31 (4):379 - 379
5.确认
我们感谢CONACYT和DGAPA支持Alejandro García de los Santos在卡尔加里大学Michael Hynes实验室的博士后停留。
豆科根瘤菌中替代因子a54调控基因的鉴定。VICIAE VF39SM
S.R.D. Clark, M.L. Tabche, B.T. Steven, A. Cieslak, M.F. Hynes生物科学系，卡尔加里大学，加拿大卡尔加里
1.介绍a54是由rpoN\识别的启动子编码的“替代”西格玛因子，显示高度保守的一致-12/-24序列，5'- CTGGCAC-N5-TTGCA -3' (Beynon et al. 1983)。(根瘤菌中独立的系统包括二羧酸转运和氮调控，以及豆科根瘤菌的fixGHIS、fixNOQP和fnrN基因。在微有氧条件下，vicae VF39SM依赖于a54进行完全诱导(Clark et al. 2001)。a54可以在没有核心聚合酶的情况下结合DNA，允许sigma因子参与负调控和正调控，这取决于启动子结构的间距(Merrick 1993)。
2.过程
用于识别cy54假定目标的策略与Bittinger等人(2000)使用的策略相似。VF39SM rpoNv。QSp突变体RM046用转座子Tn5-B30诱变(Simon et al. 1989)。该元件携带无启动子新霉素基因，生成随机报告融合池。每个突变体都进行复制镀，其中一个拷贝经偶联得到pC028。该质粒携带野生型rpoN基因，与rpoN::QSp等位基因互补。在含新霉素浓度增加的TY上筛选每个突变体的补充型和未补充型;在测试条件下，电阻水平的差异可以预测每个插入物的性质(即只有在wt rppon存在的情况下，Nmr表明(独立性)。从全基因组DNA克隆的插入物经同源性鉴定。
3.结果与讨论
在迄今为止筛选的大约2400个突变体中，54个显示假定的正调控，21个显示假定的负调控。获得的序列显示与转座酶包括ISRm3和ISRle39的同源性(Rochepeau et al. 1997);亮氨酸反应蛋白转录调节剂;还有核酸酶抑制剂。其中一个转座酶，以及lrp型调控因子，以与宿主基因相反的方向携带插入物。上游侧翼序列将使用Nmr基因引物获得。
4.参考文献
Beynon J, Cannon M, Buchanan-Wollaston V, Cannon F (1983) Cell 34, 665-671
王志刚，王志刚，王志刚(2000).微生物学与微生物学杂志，30 (3):366 - 366
Clark SRD, Oresnik IJ, Hynes MF (2001) Mol. Gen. Genet, 264,623 -633
麦里克MJ (1993) Mol. microbiology . 10, 903-909
王志强，王志强，王志强(2009)中国科学院科学院学报(自然科学版
罗晓波，李志强，李志强(1997)，中华医学杂志
继续阅读:共生和非共生珠蛋白基因表达对莲叶微共生体侵染的响应
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