大规模生产

两种不同的技术的大规模生产的昆虫病原线虫体内(i),和(2)体外。昆虫病原线虫取决于该地区的生产应用以及使用何种类型的线虫种类。如果一个小情节被应用为研究目的,体内生产技术将是适当的,否则使用字段体外方法。

13.3.5.1体内生产

白色陷阱(白1927)是最常见的一种方法产生entomo-pathogenic线虫。昆虫和昆虫病原线虫接种petridish内衬滤纸。2 - 5天之后,受感染的昆虫是转移到白色的陷阱。白色陷阱由一个倒置的手表玻璃放置在一个petridish绘画纸纸放置适当的大小和无菌蒸馏水滋润。适量的蒸馏水也保持在观察玻璃。随着感染青少年走出尸体他们迁移到周围的水和被困。线虫是收获的白色陷阱和收集在一个烧杯。线虫的浓度可以通过

图13.1昆虫病原线虫Steinernema masoodi相乘的身体Galleria mellonella幼虫(复制从阿里et al . 2005 b)

重力沉降(Dutky et al . 1964年)和(或)真空过滤(Lindergen et al . 1993年)。昆虫病原线虫体内产生高度毒性和感染性。最后大蜡螟的龄期,g . mellonella通常用于昆虫病原线虫体内生产这种昆虫是高度敏感的,容易产生高收益(图13.1)(Woodring和岩石1988)。

其他鳞翅类和鞘翅类也被用于体内线虫(Shapiro-Ilan和Gaugler 2002)的生产。昆虫线虫收益率取决于主机尺寸。一般的线虫寄主昆虫的大小成正比(Blinova和伊万诺娃1987;然而,弗兰德斯et al . 1996年)每毫克昆虫(在主机物种)和产量对感染的易感性的大小和年龄成反比主机(Dutky et al . 1964;Shapiro-Ilan et al . 1999年)。体内技术的主要缺点是生产成本,向更高的一边倾斜,作为两种不同的生物,昆虫和昆虫病原线虫培养的同时。但这样的限制并没有限制了生产技术来维持本身作为一个产业(Gaugler et al . 2000;Gaugler和汉族2002)。昆虫病原线虫体内生产可能会继续为利基市场或小型企业在这些国家劳动力成本低。雷竞技手机版app昆虫病原线虫感染主机的生产和应用尸体也是另一种鼓励这种技术(2003年Shapiro-Ilan et al . 2001年)。

13.3.5.2体外生产

床上用品(1984)开发出一种技术,大量的感染性青少年可能在经济上产生了使用鸡、鸭、火鸡内脏中多孔聚氨酯泡沫塑料衬底上。饲养容器中使用这个方法是一个玻璃烧瓶或热压处理过的塑料袋充气水族馆泵和接种大约每克2000感染青少年媒介。这种方法可以用于生产平均每袋十亿感染青少年瓶500毫升的容量(100 g的媒介)。目前,一些公司,即安德(瑞士),Bionema(瑞典),Oviplant(波兰)和线虫的生物(美国)正在使用这种技术生产埃勒斯和Shapiro-Ilan (2005)。该技术包括以下步骤。

准备饲养烧瓶/袋

小泡沫块浸满鸡、鸭或火鸡内脏的速度匀浆中泡沫的一部分重量12.5部分。500毫升容量的广口锥形烧瓶充满这泡沫匀浆混合物250 - 300毫升(约100克)。瓶的口擦拭,插入与棉花,用奶酪棉布和热压处理过的20分钟的121°C。

接种细菌

适当的Xenorhabdus或Photorhabdus细菌细胞无菌转移到5毫升的营养肉汤在试管和保存在一个振动器。包含热压处理过的材料的烧瓶接种细菌培养,一种文化的内容。瓶是动摇和存储在25°C 2 - 3天,让细菌的增殖。

与线虫接种

每个瓶殖民与细菌接种表面消毒500 - 1000感染一个适当的物种的幼体在5毫升蒸馏水消毒和孵化25°C。接种后的瓶不应该动摇大力支持更好的饲养和繁殖线虫。

收获

线虫可以收获从瓶中大约15天。20孔筛是和泡沫碎片堆5厘米深。然后放在锅里,把筛水龙头附近水位调整,泡沫块只是淹没。是留给2 h。在此期间感染青少年会迁移到水。线虫可能沉淀和冲洗去除颗粒物和不活跃或死亡的少年。感染青少年因此获得应该用专门的蒸馏水冲洗几次明确暂停。其他各种合成媒体测试,以大众文化的昆虫病原线虫已经招募(表13.3)。

表13.3不同媒体推荐给昆虫病原线虫的生产

合成培养基	线虫种类	潜伏期	温度	线虫收获	参考
牛肉膏、蛋白胨、玉米饭,水	Steinernema	- - - - - -	- - - - - -	- - - - - -	李(1984)
在海绵	feltiae
下Dogfood琼脂培养基	美国feltiae	- - - - - -	- - - - - -	10-Vg介质	Hara et al。(1981)
肾脏匀浆/脂肪	美国feltiae s bibionis s glaseri Heterorhabditis bacteriophora heliothidis	2 - 3周	25°C	3.8 x 10730烧瓶2.9 x10773烧瓶8 x10711烧瓶3.6 x10710烧瓶内 3.2 x10715烧瓶	床上用品(1981)
3% Soyapeptone + 3%酵母提取物+ 10%	美国glaseri	- - - - - -	- - - - - -	lOVweek 93天	Tarakanov (1980)
小鸡胚胎提取介质
营养肉汤酵母提取植物油。	h . heliothidis	4周	25°C	107250毫升瓶	Wouts (1981)
面粉涂在海绵
麦麸+沙拉油	美国feltiae	3周	25°C	107克中	安(1987)
麦麸	美国feltiae	3周	25°C	107克中	安(1987)

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